Святая Руфина была дочерью римского сенатора Астерия. Во время гонения императора Валериана (253-260) она осталась верной христианству, в то время как ее жених-христианин, отказался от своей веры, и пытался склонить к этому и свою невесту.
Руфина была схвачена вместе со своей сестрой Секундой, когда они пытались добраться до Этрурии. Христианки были доставлены на суд к префекту Юнию Донату, который после долгих мучений осудил их на смерть. Сестер вывели за пределы Рима и обезглавили. Тела мучениц похоронили у Аврелиевой дороги.
При Папе Юлии I (337-352) в честь них в Риме была построена церковь. В XII веке мощи были перенесены в Латеранскую базилику святого Иоанна в Риме. Часть мощей также находится в Николаевском монастыре в Форт-Майерсе (штат Флорида).
Память святой Руфины отмечается 23 июля.